<sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></dfn></sub>

      <sub id="pbpbb"><var id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></var></sub>

      <sub id="pbpbb"><var id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></var></sub>

      <thead id="pbpbb"><var id="pbpbb"><ins id="pbpbb"></ins></var></thead>

        <form id="pbpbb"></form>

          <sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></dfn></sub>
            <thead id="pbpbb"><var id="pbpbb"><ins id="pbpbb"></ins></var></thead>

            <sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"></dfn></sub><address id="pbpbb"></address>
            <form id="pbpbb"></form>

              <address id="pbpbb"><listing id="pbpbb"></listing></address>

              <form id="pbpbb"></form>

                <address id="pbpbb"></address>
              產品中心 > 熒光定量PCR Mix > HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

              HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

              促銷: 480.00~28800.00

              分享

              運費 ¥0.00
              P2201/1ml P2202/1ml×5 P2203/1ml×10 P2204/1ml×50 P2205/1ml×100

              HS Probe qPCR Mix

              Cat. #P2201,P2202,P2203,P2204,P2205

              產品簡介

              HS Probe qPCR Mix用于探針法實時定量PCR2×濃縮預混液,使用時只需加入模板、引物和探針即可進行反應。本品含有類抗體技術修飾的熱啟動酶Hotstart Taq DNA聚合酶,配合東盛特制的Real Time PCR Buffer,不僅有效抑制引物二聚體和其他非特異性擴增,而且能夠提高擴增效率,可以進行高靈敏度高特異性的PCR反應。本品在寬廣的定量域內具有良好的線性關系,對靶基因定量準確、可信度高,重復性好。本品可搭配TaqMan等各類熒光探針使用,與常見定量PCR儀完美兼容,如ABI、Roche、Bio-Rad等。

              產品組成

              Component

              P2201

              P2202

              P2203

              P2204

              P2205

              2× HS Probe qPCR Mixa

              1 ml

              1 ml×5

              1 ml×10

              1 ml×50

              1 ml×100

              超純水

              1 ml

              1 ml×5

              -

              -

              -

              a 包含Hotstart Taq DNA聚合酶,Aptamer,dNTP及反應緩沖液等。

              保存條件

              HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。

              質量控制

              純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

              功能檢測:經不同來源的模板和引物檢測,產品具有優秀的特異性、靈敏性及可重復性等。

              應用舉例

              1. 配制反應體系

              請于冰上配制以下反應體系:

              Component

              Volume

              Final concentration

              DNA template[1]

              1-4 μl

              Variable

              Forward primer (10 μM)[2]

              0.4 μl

              0.2 μM

              Reverse primer (10 μM)[2]

              0.4 μl

              0.2 μM

              2× HS Probe qPCR Mix

              10 μl

              1×

              Probe (10 μM)[3]

              Variable

              0.1-0.5 μM

              ddH2O

              Variable

              -

              Total volume[4]

              20 μl

              -

              [1] DNA模板建議用量(20 μl體系):1-10 ng cDNA,或10-100 ng gDNA。加樣體積不宜過小,以免造成較大的誤差,但未稀釋的cDNA不宜超過總體積的1/10。因此模板建議濃度(加樣前):cDNA 1-10 ng/μl,gDNA 10-100 ng/μl。

              [2] 引物終濃度建議范圍:0.1-1.0 μM, 通常引物終濃度為0.2 μM效果較好。

              [3] 使用探針的濃度與Real Time PCR擴增儀、探針種類和熒光標記物種類有關,使用時請參照相關說明。通常探針終濃度在0.1-0.5 μM之間。

              [4] 建議總體積不小于10 μl,以免造成較大的加樣誤差。具體體積范圍參考儀器說明。

              注意:對于某些固定型號的儀器,需要添加ROX才能精確測定Ct值。由于ROX的使用體積較小,建議將ROX提前與qPCR Mix混勻使用。ROX用量參照具體儀器說明,下表僅供參考。

              Instruments

              ROX (100X)

              ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700

              1-2% (High ROX)

              ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000

              0.2% (Low ROX)

              Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler

              No ROX

              2. 設定反應程序進行qPCR反應

              步法程序示例如下:

              Stage

              Temperature

              Time

              Cycle

              Initial denaturation

              95

              3 min

              1

              Denaturation

              95

              10 sec

              40

              Annealing & Extension[1]

              60

              30 sec

              [1] 儀器在此階段進行信號采集,請根據儀器類型設置。如需優化溫度,建議在55-65范圍內調整。

              若反應效果不佳,建議采用三步法擴增程序。

              經典三步法程序示例如下:

              Stage

              Temperature

              Time

              Cycle

              Initial denaturation

              95

              3 min

              1

              Denaturation

              95

              10 sec

              40

              Annealing[1]

              60

              15 sec

              Extension

              72

              20 sec

              [1]  儀器在此階段進行信號采集。常用退火溫度在55-65℃之間。退火溫度一般設定為所用引物的Tm-5℃,若低于55℃,則以Tm值為退火溫度,一般不低于55℃。請根據儀器類型設置反應時間。

              3. 分析結果

              觀察擴增曲線;調整基線,計算Ct值;進行相對或絕對定量。

              注意事項

              ? 使用前Mix需要完全解凍,充分混勻。盡量避免多次反復凍融。短期使用可保存于4℃。

              ? 將(n+x)份反應液混勻后再分注到n個單管中,可降低加樣誤差。(n為重復次數,x為損耗量,一般為n1/10

              ? ABI的定量儀器大部分需要ROX校正管間差異,Bio-Rad的定量儀器不需要ROX校正。具體儀器請參照其使用說明。

              ? 輕輕混勻反應液,避免產生氣泡,氣泡會干擾熒光檢測??伤矔r離心去除氣泡。

               引物的特異性、用量以及退火溫度是影響實驗結果的重要因素。務必設計特異性好的引物,隨實驗結果適當調整引物用量(0.1 μM-1.0 μM——特異性較差時減少引物用量,或以3℃為增量提高退火溫度,擴增效率較低時增加引物用量。

              ? DNA模板的量應小于500 ng/反應,過高的模板量會引起非特異性擴增。應根據模板類型與基因表達量適當調整用量。

              ? 各類探針應參照相應的指南進行設計,并根據所用擴增儀類型、探針種類和熒光標記物種類等調整用量。

               

              相關產品

              名稱

              貨號

              規格

              PCR Mix

              P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              Power Green qPCR Mix

              P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              1kb ladder

              M1181/M1182

              50/250

              DSTM5000

              M1111/M1112

              60/300

              高純度質粒小提試劑盒

              N1011/N1012/N1013

              50/100/200

              通用RNA提取試劑盒

              R1051

              50

              基因組DNA快速提取試劑盒

              N1111/N1112

              50/100

              DNA凝膠回收試劑盒

              N1071/N1072/N1073

              50/100/200

              RT-PCR Kit

              R1011/R1012

              20/100

              更多PCR酶、DNA Marker及核酸提純類產品請登錄東盛生物官網查詢。

               


              姓名
              電話號碼
              電子郵箱
              公司名稱
              地址
              留言*
               
              驗證碼
              提交
              欧美日韩亚洲囯产在线,国产亚洲日韩欧美看国产,国产亚洲日韩欧美看国产,天堂A亚洲欧美日韩国产综合