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              DNA凝膠回收試劑盒(N1071-N1072-N1073)

              促銷: 312.00~1066.00

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              N1071(50次) N1072(100次) N1073(200次)

              DNA凝膠回收試劑盒

               

              產品組分

               

              貨號

              N1071

              50次)

              N1072

              100次)

              N1073

              200次)

              溶液BD

              20 ml

              40 ml

              80 ml

              溶液PE

              15 ml

              15 ml×2

              20 ml×3

              溶液Eluent

              2.5 ml

              5 ml

              10 ml

              DNA純化柱

              50

              100

              200

              說明書

              1

              1

              1


              溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

              溶液BD中含有變性劑,請不要直接接觸皮膚。

              上述產品組分均可單獨購買,詳見產品索引。

              產品說明

              本產品采用了經典的硅膠膜技術,用于從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段(50 bp-10 kb),也適合從PCR產物、酶促反應液中回收DNA,也可用于基因組DNA等樣品的純化。其純化原理是含有目的片段的瓊脂糖凝膠溶解后,硅膠膜柱高效可逆地吸附體系中的DNA片段(高鹽、低pH值),蛋白及其它雜質不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低鹽、高pH值條件下再被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段,此DNA片段可直接用于各種酶促反應等。

               

              質量控制

              1 % TAE瓊脂糖凝膠中純化50 bp、1,000 bp、10,000 bpDNA片段。

               

              保存條件

              室溫保存2年。

               

              注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

              溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。

              本產品對電泳使用的瓊脂糖種類沒有嚴格限制。為了保證回收DNA的質量和回收效率,盡量使用高純度的瓊脂糖。

              電泳時請使用新鮮配制的TAE電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。TBE電泳緩沖液中的硼酸與瓊脂糖相互作用生成的復合物會影響DNA的回收效率,因此TBE凝膠電泳不適合用于DNA回收。

              請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。

              為提高DNA回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。

              本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小或DNA初始量少,回

              收率將會偏低。

              溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直

              接用于各種酶促反應等,不會影響后續試驗。

              為了保證回收效率,請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。

              請嚴格按照操作步驟操作。


              操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

              切取含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠條帶。

              盡量切除不含有目的DNA部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA回收率。

              切膠時,請使用長波長UV360 nm)光盒。且不要將DNA長時間暴 露在紫外燈下,以防DNA損傷。

              稱取凝膠的重量,近似地確定其體積。

              凝膠重量的稱量方法:取1.5 ml2 ml離心管,用電子天平稱其初質量,切膠裝在離心管后稱終質

              量,兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。

              按照每100 mg瓊脂糖凝膠對應100 μl溶液BD的比例,向離心管中加入溶液BD。

              4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝膠完全融化。期間需要顛倒混合3次。

              瓊脂糖必須完全融化,以免堵塞柱子,嚴重影響DNA片段的回收效率。

              如果總體積大于500 μl,可適當增加溶膠時間。

              若此時溶液變紅,可加10 μl 3M NaAcpH 5.2)。

              如要從反應液中回收DNA,則向反應液中加入等體積的BD,充分混勻,后續步驟相同:

              將步驟4所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。

              膠塊完全溶解后最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA的能力     較弱。

              ●  如果所獲溶液過多,超過DNA純化柱容積(700 μl),可分次加入DNA純化柱中。

              6  12,000 rpm離心1min。若溶液體積大于DNA純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。

              此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

              加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

              溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

              此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量的DNA片段。

              加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

              9  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中的液體。

              此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續酶促反應。同時也利于DNA片段的充分溶解。

              10  將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 μl溶液Eluent60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。

              溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的片段的多少、 用戶對目的片段濃度要求而定。

              對溶液Eluent 65℃預熱,會提高提取DNA目的片段的產量。



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