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              PCR Mix(P2011-P2012-P2013-P2014-P2015)

              促銷: 156.00~5850.00

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              P2011(1 ml) P2012(5 ml) P2013(10ml) P2014(50ml) P2015(100ml)

              PCR Mix

              Cat. #P2011,P2012,P2013,P2014,P2015

              產品簡介

              PCR Mix濃縮的PCR擴增預混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等PCR擴增必需組分(模板與引物除外)。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR,大大簡化操作過程,縮短操作時間,降低污染(加樣次數減少)同時,由于體系內含有增強劑,能夠顯著增強PCR擴增的靈敏度。擴增產物具有3’-dA突出端,可直接用于TA克隆。

              Taq DNA聚合酶是嗜熱性細菌Thermus aquaticus來源的熱穩定重組型Taq DNA聚合酶,分子量為94 KD。擴增片段的長度可達10 kb(簡單模板)。延伸速度為1min/kb70-75℃,簡單模板可達10s/kb)。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。

              產品組成

              Component

              P2011

              P2012

              P2013

              P2014

              P2015

              2× PCR Mix

              1 ml

              1 ml× 5

              1 ml× 10

              1 ml× 50

              1 ml× 100

              超純水

              1 ml

              1 ml× 5

              -

              -

              -

              本產品分含體系中包含溴酚藍、不含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的產品,PCR擴增產物可直接電泳檢測。這兩類產品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍的包裝。

              保存條件

              -20℃保存2年。

              質量控制

              純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

              功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

              應用舉例

              1. 配制反應體系

              請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

              Ordinal

              Component

              Volume

              (50 μl reaction volume)

              Final   concentration

              (50 μl reaction volume)

              1

              2× PCR Mix

              25   μl

              2

              upstream   primer (10 μM)[1]

              2 μl

              0.4   μM

              3

              downstream   primer (10 μM)[1]

              2 μl

              0.4   μM

              4

              template   DNA[2]

              1-4   μl

              <1μg

              5

              超純水[3]

              To   50 μl

              -

              optional

              MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

              Variable

              -

              [1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

              [2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

              Template

              人類基因組DNA

              λDNA

              大腸桿菌基因組DNA

              質粒DNA

              Dosage

              0.1μg-1μg

              0.5ng-5ng

              10ng-100ng

              0.1ng-10ng

              [3] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

              [4] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

              2. 設定反應程序進行PCR反應

              Stage  

              Temperature

              Time

              Number   of Cycles

              Initial   Denaturation

              94℃

              3   min

              1

              Denaturation

              94℃

              30   sec

              25-35  

              Annealing

              55-68℃[1]

              30   sec

              Extension

              72℃

              Variable[2]

              Final   Extension

              72℃

              5-10   min

              1

              [1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

              [2] 延伸時間按1min/kb來設最佳(簡單模板可達10s/kb)。

              3. 分析結果

              反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

              無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

              操作注意事項

              1 室溫下Taq DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加模板DNA。

              2 Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

              3 堿基錯誤率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5。

              引物設計注意事項

              引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

              相關產品

              名稱

              貨號

              規格

              PCR Mix

              P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              Power Green qPCR Mix

              P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              1kb ladder

              M1181/M1182

              50/250

              DSTM5000

              M1111/M1112

              60/300

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              N1011/N1012/N1013

              50/100/200

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              R1051

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              N1111/N1112

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              RT-PCR Kit

              R1011/R1012

              20/100

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