<sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></dfn></sub>

      <sub id="pbpbb"><var id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></var></sub>

      <sub id="pbpbb"><var id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></var></sub>

      <thead id="pbpbb"><var id="pbpbb"><ins id="pbpbb"></ins></var></thead>

        <form id="pbpbb"></form>

          <sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"><mark id="pbpbb"></mark></dfn></sub>
            <thead id="pbpbb"><var id="pbpbb"><ins id="pbpbb"></ins></var></thead>

            <sub id="pbpbb"><dfn id="pbpbb"></dfn></sub><address id="pbpbb"></address>
            <form id="pbpbb"></form>

              <address id="pbpbb"><listing id="pbpbb"></listing></address>

              <form id="pbpbb"></form>

                <address id="pbpbb"></address>
              產品中心 > 嗜熱DNA聚合酶 > Taq Plus DNA聚合酶(P1031-P1032-P1033-P1034)

              Taq Plus DNA聚合酶(P1031-P1032-P1033-P1034)

              促銷: 156.00~650.00

              分享

              運費 ¥0.00
              P1031(250U) P1032*(250U) P1033(1000U) P1034*(1000U)

              Taq Plus DNA聚合酶

              Cat. #P1031,P1032,P1033,P1034

              產品簡介

              Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶與Pfu DNA聚合酶的獨特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍,擴增片段的長度可達20 kb(簡單模板)。在擴增復雜模板(如GC-rich或重復序列)時,Taq Plus DNA聚合酶的擴增效率高于Taq DNA聚合酶,可用于復雜模板的PCR擴增。延伸速度為20s/kb70~75℃,簡單模板可達5s/kb)。擴增產物具有兩種末端:平末端與3'-dA。

              產品組成

              Component

              P1031

              250U

              P1032

              250U

              P1033

              1,000U

              P1034

              1,000U

              Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[1]

              50 μl

              50 μl

              200 μl

              200 μl

              Taq Plus DNA聚合酶(2.5U/μl[1]

              100 μl

              100 μl

              400 μl

              400 μl

              10× Tpol BufferMg2+ Plus[1]

              1.25 ml

              1.25 ml

              1.25 ml × 4

              1.25 ml × 4

              6× Loading Buffer[2]

              1 ml

              1 ml

              1 ml

              1 ml

              dNTPs2.5mM[3]

              -

              1 ml

              -

              1 ml × 4

              [1] 提供5U/μl2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇,如無特別說明默認5U/μl。

              [2] 10× Tpol Buffer分為Mg2+ PlusMg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如無特別說明提供10× Tpol BufferMg2+ Plus)。Mg2+ Free10× Tpol Buffer提供25 mM MgSO4。提供5U/μl2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇,如無特別說明默認5U/μl。

              [3] 6× Loading Buffer,如有需要可單獨購買(Cat. #M9041)。

              [4] dNTPsdATP、dGTP、dCTPdTTP等摩爾混合物,P1011/P1013不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. # P9011/P9012/P9013)。

              活性定義

              一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

              保存條件

              -20℃保存2年。

              質量控制

              純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

              功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

              應用舉例

              1. 配制反應體系

              請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

              Ordinal

              Component

              Volume

              (50 μl reaction volume)

              Final   concentration

              (50 μl reaction volume)

              1

              10× Tpol BufferMg2+ Plus

              5 μl

              2

              dNTPs2.5mM

              4 μl

              0.4 mM

              3

              upstream primer (10 μM)[1]

              2 μl

              0.4 μM

              4

              downstream primer (10 μM)[1]

              2 μl

              0.4 μM

              5

              Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[2]

              0.5 μl

              2.5U

              6

              template DNA[3]

              1-4 μl

              <1μg

              7

              超純水[4]

              To 50 μl

              -

              optional

              MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[6]

              Variable

              -

              [1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

              [2] 根據目的片段擴增的難易程度調整酶的用量。

              [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

              Template

              Dosage

              人類基因組DNA

              0.1μg-1μg

              λDNA

              0.5ng-5ng

              大腸桿菌基因組DNA

              10ng-100ng

              質粒DNA

              0.1ng-10ng

              [4] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

              [5] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

              2. 設定反應程序進行PCR反應

              Stage

              Temperature

              Time

              Number of Cycles

              Initial Denaturation

              94℃

              3 min

              1

              Denaturation

              94℃

              30 sec

              25-35

              Annealing

              55-68℃[1]

              30 sec

              Extension

              72℃

              Variable[2]

              Final Extension

              72℃

              5-10 min

              1

              [1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

              [2] 延伸時間按20s/kb來設最佳(簡單模板可達5s/kb)。

              3. 分析結果

              將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

              無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

              操作注意事項

              1 室溫下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA。

              2 Taq Plus DNA聚合酶的擴增產物有兩種末端:平末端和3'-dA突出末端。如要進行TA克隆,請先進行加A反應,以提高克隆效率。(加A反應:參考如下體系,72℃,15-30min

              PCR(純化)產物

              1-7 μl

              10× Taq BufferMg2+ Plus

              1 μl

              dATP

              0.2 mM

              Taq DNA聚合酶

              5U

              超純水

              To 10 μl

              引物設計注意事項

              引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

              相關產品

              名稱

              貨號

              規格

              PCR Mix

              P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              Power Green qPCR Mix

              P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

              1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

              1kb ladder

              M1181/M1182

              50/250

              DSTM5000

              M1111/M1112

              60/300

              高純度質粒小提試劑盒

              N1011/N1012/N1013

              50/100/200

              通用RNA提取試劑盒

              R1051

              50

              基因組DNA快速提取試劑盒

              N1111/N1112

              50/100

              DNA凝膠回收試劑盒

              N1071/N1072/N1073

              50/100/200

              RT-PCR Kit

              R1011/R1012

              20/100

              更多PCR酶、DNA Marker及核酸提純類產品請登錄東盛生物官網查詢。

               


              姓名
              電話號碼
              電子郵箱
              公司名稱
              地址
              留言*
               
              驗證碼
              提交
              欧美日韩亚洲囯产在线,国产亚洲日韩欧美看国产,国产亚洲日韩欧美看国产,天堂A亚洲欧美日韩国产综合